Per poder extreure els pigments dels cloroplasts estan suspesos en un tampó d'aïllament. Per poder extreure els pigments dels cloroplasts, primer hem de desfer-nos del tampó. Quina és la millor manera de separar els cloroplasts del tampó? utilitzeu una centrífuga per separar els
Com aïlles un cloroplast?
En el mètode d'aïllament de cloroplasts, la paret cel·lular es trenca mecànicament amb una batedora o un homogeneïtzador. A continuació, el teixit de la fulla sense trencar i les restes cel·lulars s'eliminen per filtració. Els cloroplasts es recullen per centrifugació mitjançant un gradient de percoll.
Com es fa un tampó d'aïllament de cloroplasts?
Prepareu la quantitat necessària de tampó d'aïllament de cloroplast 1X diluint el tampó 2X 1:1 amb aigua dH2O Afegiu 10 µL de solució de BSA al 10% per ml de cloroplast 1X Tampó d'aïllament. Just abans d'utilitzar-lo, afegiu 1 µL de DTT per 1 mL de tampó d'aïllament de cloroplast. Etiqueta aquesta memòria intermèdia com a "Buffer complet ".
Què hi ha en un tampó d'aïllament de cloroplasts?
El tampó d'aïllament d'ADN consistia en 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM EDTA i 1 mM DTT La lisi de cloroplast es va obtenir incubant el pellet de cloroplast amb 8 ml de tampó d'aïllament d'ADN, 1,5 ml de SDS al 20%, 20 µl de 2-mercaptoetanol i 30 µl de Proteinasa K (10 mg/ml) en un tub de centrífuga a 55 °C durant 4 h.
Quin és el pH del tampó utilitzat per homogeneïtzar la fulla d'espinacs en el protocol d'aïllament de cloroplasts?
Els espinacs estan carregats de bons cloroplasts i s'aïllen fàcilment. Haureu de posar les fulles en una batedora freda amb tampó fosfat 0,1 M, pH 7,5 i sacarosa 0,5 M per evitar que esclatin.
