Si la proteïna no té la mateixa mida que l'anticossos, podeu eluir amb 0,1M glicina, pH2-3 i després separar la proteïna d'interès de l'anticossos mitjançant SEC (com el superdex 200).
Què és eluir una proteïna?
Les proteïnes són eluïdes per un gradient de quantitats creixents d'un dissolvent orgànic, com ara l'acetonitril. Les proteïnes elueixen segons la seva hidrofobicitat. Després de la purificació per HPLC, la proteïna es troba en una solució que només conté compostos volàtils i es pot liofilitzar fàcilment.
Per què les proteïnes tenen una elució de pH baix?
L'ús de tampó de pH baix per a l'elució de la proteïna A és conegut per contribuir a l'agregació del producte No obstant això, un conjunt més limitat d'evidències suggereix que el pH baix pot no ser l'únic causa de l'agregació en la cromatografia de proteïna A, més aviat, altres facetes del procés poden contribuir significativament.
Com es fa l'elució?
En química analítica i orgànica, l'elució és el procés d' extreure un material d'un altre rentant-lo amb un dissolvent; com en el rentat de resines intercanviadores d'ions carregades per eliminar els ions capturats. … Després que les molècules de dissolvent desplacen l'analit, l'analit es pot extreure de la columna per analitzar-lo.
Quants anticossos necessiteu per a Coip?
Per als experiments rutinaris de Co-IP, l'anticossos que vaig utilitzar és no més de 2ug (al meu conjunt, 1,4 -2,0 ug d'anticossos són suficients per capturar 2500-5000 ug de lisat de proteïnes.) Però encara depèn dels nivells d'expressió de les vostres proteïnes objectiu a les vostres mostres, de manera que probablement haureu de fer algunes modificacions.
How Much Protein Do You Need? Explained by Dr. Berg
