El següent és una visió general dels diferents passos d'un protocol de tinció d'immunofluorescència indirecta
- Planificació d'experiments i preparació de mostres. …
- Fixació de mostres. …
- Permeabilització cel·lular. …
- Bloqueig. …
- Incubació d'anticossos primaris. …
- Incubació d'anticossos secundària. …
- Contrataca i muntatge.
Com es realitza la immunofluorescència?
Tots els passos d'incubació tenen lloc a temperatura ambient
- Renteu les cèl·lules dues vegades i utilitzeu unes pinces per col·locar amb cura el cobreobjectes amb les cèl·lules cap amunt a la cambra humidificada.
- Reparar amb formaldehid al 4% durant 10 minuts i rentar 3 ×.
- Permeabilitzar amb un 0,1 % de TX-100/PBS durant 15-20 minuts i rentar 3 ×.
Com s'utilitza la immunofluorescència en una cèl·lula?
Protocol d'immunofluorescència per a cèl·lules adherents
- Llavor 1–1,5 x104 cèl·lules per pou d'un portaobjectes de 4 cambres en 500 ml de medi de cultiu. Incubar a 37 °C al 5% de CO2.
- 32–36 hores després de la sembra de cèl·lules, traieu el medi de cultiu cel·lular i esbandiu les cèl·lules 3 vegades amb 500 µL de 1X PBS.
Quin és un exemple d'immunofluorescència?
Per exemple, un investigador pot crear anticossos primaris en una cabra que reconeguin diversos antígens i, a continuació, emprar anticossos secundaris de conill acoblats amb colorants que reconeixen la regió constant d'anticossos de cabra ( anticossos anti-cabra de conill).
Per a què serveix la tinció d'immunofluorescència?
La tinció d'immunofluorescència (IF) és una tècnica àmpliament utilitzada en la investigació biològica i el diagnòstic clínic IF utilitza anticossos marcats amb fluorescència per detectar antígens objectiu específics. Seguida de la imatge, és una tècnica molt directa, ja que realment podeu veure alguna cosa.
